Lokalne odnowienie dystrofiny za pomocą antysensownego oligonukleotydu PRO051 ad 6

Przed leczeniem nie wykryto dystrofiny. Tabela 1. Tabela 1. Charakterystyka wyjściowa pacjentów. Badanie miało obejmować od czterech do sześciu pacjentów. Sześciu pacjentów zostało zaproszonych do udziału, a jeden odmówił. Pozostałych pięciu pacjentów poddano wstępnej kontroli. Po pierwsze, stan mięśnia piszczelowego przedniego oceniano na podstawie MRI. Stan mięśni czterech pacjentów został uznany za odpowiedni do badania (ryc. 2A), a brak dystrofiny potwierdzono w oryginalnych próbkach biopsyjnych pacjentów (ryc. 2B). Po drugie, status mutacji i pozytywna odpowiedź na pomijanie egzonów w PRO051 tych czterech pacjentów została potwierdzona w hodowlach fibroblastów. Leczenie PRO051 wygenerowało nowy, krótszy fragment informacyjnego RNA dla każdego pacjenta, reprezentujący 46% (u Pacjenta 4) do 90% (u Pacjenta 1) całego produktu RT-PCR (Figura 2C). Precyzyjne pomijanie eksonu-51 potwierdzono przez sekwencjonowanie (figura 2D). Żadne inne regiony transkrypcyjne nie zostały zmienione. Analizy immunofluorescencyjne wykazały przewagę miotubul o dodatnich dystrofinach (Figura 2E), co potwierdzono analizą Western blot (nie pokazano). Tak więc czterech pacjentów zostało uznanych za kwalifikujących się do leczenia PRO051. Ich wyjściową charakterystykę przedstawiono w tabeli 1.
Bezpieczeństwo i zdarzenia niepożądane
Wszyscy pacjenci mieli jedno lub więcej zdarzeń niepożądanych. Jednak tylko jeden pacjent zgłosił łagodny miejscowy ból w miejscu wstrzyknięcia, co uznano za niekorzystne zdarzenie związane z badanym lekiem. Inne zdarzenia obejmowały łagodny lub umiarkowany ból po biopsji mięśnia. Dwóch pacjentów miało pęcherze pod bandażami stosowanymi do zamknięcia rany. W okresie między wstrzyknięciem a biopsją dwóch pacjentów zgłosiło kilka dni wystąpienia objawów grypopodobnych, a jeden pacjent miał łagodną biegunkę przez dzień. W punkcie wyjściowym, wyniki siły mięśniowej leczonego mięśnia piszczelowego przedniego u pacjentów 1, 2, 3 i 4 wynosiły odpowiednio 4, 2, 3 i 4 w skali Medical Research Council. Żaden z pacjentów nie wykazał zmian w sile tego mięśnia podczas badania lub znaczących zmian w standardowych pomiarach laboratoryjnych lub zwiększonych pomiarach produktów z rozdzieleniem dopełniacza lub czasu aktywowanej częściowej tromboplastyny. Nie wykryto miejscowej reakcji zapalnej lub toksycznej w sekcjach mięśniowych pacjentów (dane nie przedstawione). Pacjentowi 3 z powodzeniem poddano planową operację skoliozy w miesiącu po ukończeniu badania.
Poziom RNA i białka
Rysunek 3. Rycina 3. Analiza RT-PCR RNA izolowanego z próbek seryjnych próbek biopsyjnych od pacjentów. Po traktowaniu PRO051, analiza odwrotnej transkryptazy-reakcji łańcuchowej polimerazy (RT-PCR) pokazuje nowe, krótsze fragmenty transkryptu dla każdego pacjenta. Zarówno rozmiar jak i sekwencja tych fragmentów potwierdzają dokładne pomijanie egzonu 51. Nie zaobserwowano żadnych dodatkowych wariantów składania. Po 28 dniach wykryto wciąż znaczące transkrypty RNA w ramce, co sugeruje przedłużone utrzymywanie się PRO051 w mięśniach. Ze względu na małą ilość materiału przekrojowego zastosowano warunki PCR o wysokiej czułości; proces ten wykluczał dokładną kwantyfikację pomijanych wydajności i znaczącej korelacji między poziomami RNA i białka
[podobne: beagle allegro, olej ryżowy na włosy, leki od a do z ]