Ekspresja endoteliny-1 w płucach pacjentów z nadciśnieniem płucnym ad

Grupa składała się z 11 pacjentów z pleksogenną arteriopatią płuc (stopnie od 4 do 6), z których 18 miało kliniczną diagnozę pierwotnego nadciśnienia płucnego zgodnie z kryteriami National Heart, Lung and Blood Institute19 (Tabela 1). Grupa 2 składała się z 17 pacjentów z wtórnymi przyczynami nadciśnienia płucnego i nie więcej niż stopnia arteriopatii płucnej stopnia 3. 18 (Tabela 2). Pacjenci z wtórnym nadciśnieniem płucnym byli starsi od pacjentów z pleksogenną arteriopatią płuc i mieli znacznie niższe wymuszone objętości wydechowe, zdolności dyfuzyjne dla tlenku węgla i poziomy hemoglobiny. Nie stwierdzono jednak istotnych różnic w tętniczym ciśnieniu płucnym i oporze naczyniowym między obiema grupami. Próbki kontrolne otrzymano od 5 pacjentów (3 mężczyzn i 2 kobiety, 19 do 67 lat [średnia, 50]) z chorobami płucnymi innymi niż idiopatyczne zwłóknienie płuc lub nadciśnienie (np. Śródmiąższowe zapalenie płuc) oraz z niewykorzystanych normalnych płuc 10 narządów dawcy (6 kobiet i 4 dawców męskich, 17 do 46 lat [średnia, 30]). Tkanki utrwalono w 10% zbuforowanej formalinie lub roztworze Bouina i zatopiono w parafinie do rutynowych badań patologicznych i analizy immunocytochemicznej. Metoda utrwalania nie wpłynęła na intensywność immunobarwienia u pięciu próbek przygotowanych za pomocą obu metod. W celu zlokalizowania informacyjnego RNA endoteliny-1 (mRNA) tkanki zamrożono w ciekłym azocie lub utrwalono w 4% paraformaldehydzie w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (0,1 mol fosforanu sodu i 0,15 mola chlorku sodu na litr, pH 7,2; ) i przemywano solą fizjologiczną buforowaną fosforanem zawierającą 15% sacharozy i 0,01% azydku sodu w temperaturze 4 ° C. Analiza immunocytochemiczna
Zastosowano dwie poliklonalne surowice odpornościowe przeciwko ludzkiej endotelinie-1: jedną na C-końcu endoteliny-1, a drugą na C-końcowym fragmencie dużej endoteliny-1 (wielka endotelina-122-38). Dwie surowice odpornościowe endoteliny zostały uniesione, jak opisano wcześniej20. Zastosowano również handlową antysurowicę przeciwko ludzkiej endotelinie-1 (Peninsula Laboratories, Belmont, CA). Ponadto jako znacznik komórek śródbłonka użyto surowicy odpornościowej na czynnik von Willebranda (antygen związany z czynnikiem VIII) (Dako, Santa Barbara, CA). Zastosowano metodę kompleksu avidin-biotyna-peroksydaza21, jak opisano wcześniej14. Kontrole negatywne przygotowano z użyciem specyficznej surowicy wchłanianej przez reaktywne krzyżowo endoteliny lub z surowicą nieimmunologiczną zamiast pierwotnej surowicy odpornościowej lub poprzez pominięcie etapów w procedurze awidyna-biotyna-peroksydaza.
Trzy sekcje barwiono każdą surowicą odpornościową i klasyfikowano półilościowo, jak opisano wcześniej22. Skrawki mikroskopowe poddano badaniu na lokalizację immunoreaktywności typu endoteliny-1, szczególnie w śródbłonku naczyniowym i nabłonku dróg oddechowych. Intensywność barwienia była oceniana półilościowo od 0 do 4, przy czym 0 oznacza brak jakiegokolwiek zabarwienia i 4 maksymalne natężenie, odpowiadające intensywności barwienia czynnikiem VIII. Ocena została przeprowadzona przez dwóch badaczy bez wcześniejszej wiedzy na temat kategorii diagnostycznych lub informacji klinicznych
[więcej w: usuwanie zębów pod narkozą cena, olej ryżowy na włosy, grupa papanicolaou ]